Bio-Rad 1658033 小型垂直電泳轉(zhuǎn)印系統(tǒng)科研應(yīng)用指南

——高效、緊湊的蛋白/核酸分離與轉(zhuǎn)印一體化解決方案

一、系統(tǒng)核心特性與創(chuàng)新設(shè)計

1.1 模塊化組件設(shè)計

電泳槽：

最大支持 10 cm × 10 cm 凝膠（2塊，厚度0.5-1.5 mm）

冷卻芯設(shè)計（溫升＜5℃/小時，200V條件下）

轉(zhuǎn)印模塊：

半干轉(zhuǎn)/濕轉(zhuǎn)雙模式切換

最大轉(zhuǎn)印效率：＞90%（測試蛋白10-150 kDa）

1.2 關(guān)鍵性能參數(shù)

參數(shù)1658033系統(tǒng)常規(guī)小型系統(tǒng)

最大電壓500 V300 V

運(yùn)行時間（SDS-PAGE）35分鐘（200 V）50-60分鐘

轉(zhuǎn)印面積20 cm210-15 cm2

緩沖液需求量300 mL（電泳）500 mL

1.3 適用研究場景

推薦應(yīng)用：

? 快速蛋白篩查（如CRISPR編輯驗(yàn)證）

? 低豐度核酸檢測（Northern blot）

? 教學(xué)實(shí)驗(yàn)室高通量操作

二、標(biāo)準(zhǔn)化操作流程

2.1 電泳步驟

復(fù)制

1. 凝膠安裝：

- 將預(yù)制膠卡入槽體，加入1×Running Buffer

- 避免緩沖液溢出（液面超過電極1 cm）

2. 上樣：

- 使用10 μL上樣槍頭（最大上樣量25 μL/孔）

3. 運(yùn)行：

- 初始電壓80 V（濃縮膠），進(jìn)入分離膠后調(diào)至120-150 V

2.2 半干轉(zhuǎn)印方案

步驟條件注意事項(xiàng)

膜/濾紙預(yù)處理浸漬轉(zhuǎn)印緩沖液10秒避免氣泡滯留

"三明治"組裝負(fù)極→濾紙/膠/膜/濾紙→正極戴手套操作

轉(zhuǎn)印參數(shù)15 V, 30分鐘分子量＞100 kDa需延長至45分鐘

三、性能優(yōu)化與問題排查

3.1 電泳質(zhì)量評估

合格標(biāo)準(zhǔn)：

? 蛋白Marker條帶清晰（無彌散）

? 前沿指示劑（溴酚藍(lán)）呈直線遷移

3.2 轉(zhuǎn)印效率驗(yàn)證

Ponceau S染色法：

復(fù)制

1. 轉(zhuǎn)印后膜用0.1% Ponceau S染色5分鐘

2. 脫色后觀察：

- 合格：所有目標(biāo)條帶可見

- 失敗：高分子量蛋白缺失（需延長轉(zhuǎn)印時間）

3.3 常見問題診斷

現(xiàn)象可能原因解決方案

條帶彎曲緩沖離子強(qiáng)度不均新鮮配制Running Buffer

轉(zhuǎn)印后信號弱甲醇濃度過高（＞20%）降低至10%甲醇

凝膠熔融電流過高/冷卻失效檢查冷卻循環(huán)系統(tǒng)

四、技術(shù)問答（Q&A）

Q1：能否用于非變性蛋白電泳？

需改用 Native PAGE緩沖液套裝（Cat. 1610738），并取消SDS

Q2：最小檢測蛋白量？

配合高敏發(fā)光底物（如Clarity Max）可檢測 0.5 pg/band

文檔優(yōu)化建議：

插入 【電泳-轉(zhuǎn)印工作流程圖】 標(biāo)注關(guān)鍵參數(shù)

添加 緩沖液配方二維碼（鏈接至Bio-Rad數(shù)據(jù)庫）

關(guān)鍵步驟用 ??警示框 強(qiáng)調(diào)（如"勿使用氯化鈉緩沖液"）